2.T4DNA聚合酶的用途
(1)利用取代合成反应制备探针
(2)标记具有平末端的或具有3’-隐蔽末端的DNA片段
利用较强的3 ′→ 5 ′外切酶活性和 5′→3′聚合活性
(3)用于DNA序列分析
(四)逆转录酶(反转录酶)
逆转录酶 是一种依赖RNA的DNA聚合酶。
此酶首先是1970年从鼠白血病毒和劳氏肉瘤病毒中发现的。这两个课题组的论文都发在了同一期的《Nature》杂志上。
最普遍使用的是从鸟类骨髓母细胞瘤病毒(AMV)分离出来的。
活性:一种可以有效地将mRNA反转录成DNA的酶,其产物称为cDNA(complementary DNA).
主要用途是 将mRNA转录成cDNA以制备基因片段。
四、修饰性工具酶
(一)末端转移酶(terminal transferase)
l 末端转移酶是一类不依赖于DNA模板的DNA聚合酶。
l 特性:该类酶可以在没有模板链存在的情况下,将核苷酸连接到dsDNA或ssDNA的在3’-OH。特别是对于平末端的双链DNA末端加尾十分有用。
l 最常见的用途:给外源DNA片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴,以创造黏性末端,便于重组。
(二) SI核酸酶(SI nuclease)
这是一种从米曲霉(Aspergillus oryzae)中分离的高度单链特异的外切酶。
活性:可以降解单链DNA或RNA或双链的单链区。
其主要用途有:
1. 在cDNA合成过程中,切开cDNA的发夹末端;
2. 载体构建过程中,切去DNA片段的单链尾巴,
形成平末端结构。
(三)碱性磷酸酶
从大肠杆菌中分离的细菌碱性磷酸酶(Bacterial Alkaline Phosphatase)简称BAP。
从小牛肠中分离的叫小牛肠碱性磷酸酶( Calf Intestinal Alkaline Phosphatase) ,简称CIP,用的广泛。
酶催功能:
脱磷酸作用,将单链或双链DNA或RNA5’-P转化成5’-OH。
其主要用途有:
⑴在用32P标记DNA 5′端之前,去除5′端的磷;
⑵在DNA重组技术中,去除DNA片段的5′磷酸,防止载体的自身环化,提高重组子比例。(中国酶制剂网 www.cnenzyme.com)