1.l 原理
纤维素酶是水解纤维素生产葡萄糖及纤维二糖的一类酶的总称。包括C1酶、CX酶及纤维二糖酶。C1酶使天然纤维素晶体分链，成为直链纤维素。CX酶不能水解天然纤维素，但能分解直链纤维素β-1，4糖苷键生成纤维二糖。纤维二糖经过纤维二糖酶作用生成葡萄糖。测定葡萄糖的方法很多，比较简单的方法可以采用3，5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)。3，5-H硝基水杨酸是一种氧化剂，能与还原糖作用，使硝基还原成氨基，溶液变为橙色。在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。但是不同来源的纤维素酶对不同的天然纤维素的分解能力也不同，即使是同一种酶，对不同的天然纤维素的分解能力也不同。为了统一标准，目前通常以羧甲基纤维素钠盐(简称CMC)作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMC无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素，天然纤维素不溶于水，而CMC有很强的亲水性，非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下，同一种纤维素酶分解CMC所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。因此CMC酶活力只能代表CX酶的活力，而且它的数值总是比较高的，只能供作参考。
1.2 操作方法
1.2.1 试剂
1.2.1.l 二硝基水杨酸试剂
称取酒石酸钾钠91g，溶于500ml水中，再依次加入3，5-二硝基水杨酸3.5g，NaOH2Og，加热搅拌、溶解，再加入重蒸酚2.5g，无水亚硫酸钠2.5g，加热搅拌、溶解，冷却后定容至 1000ml。储棕色瓶中，放置一周后使用。
1.2.1.2 pH值为4.6的柠檬酸缓冲浓浓度为0.1mol/l的柠檬酸溶液26.7ml和浓度为0.2mol/l的磷酸氢二钠溶液23.3ml，混合后加水稀释到1000ml。
1.2.1.3 pH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液取浓度为0.2mol/l的磷酸氢二纳溶液25.7ml和浓度为0.1mol/l柠檬酸溶液24.3m1，混合后加水稀释至 1000ml。
1.2.1.4 羧甲基纤维素钠盐溶液称取CMC 1g，加水1000ml，在水浴中加热溶解，再加入20mlpH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液和 40ml水，混匀。
1.2.1.5 500μg/ml标准葡萄糖溶液称取分析纯葡萄糖0.5g(在105℃干燥至恒重)，加蒸馏水溶解，定容至 1O00ml。
1.2.2 绘制标准曲线配制浓度(单位：μg/ml)分别为：O、40、80、100、160、200、240的葡萄糖溶液。各取5ml加入到不同的试管中，再分别加入DNS试剂5ml，加热煮沸5min，取出置冷水中冷却，在721型分光光度计上比色。(波长为520nm，以浓度为0μg/ml的葡萄糖反应液体作空白对照)。
1.2.3 样品酶活的测定取纤维素酶粉5g，充分碾细，加100ml蒸馏水，与40℃水浴中，搅拌3Omin，使酶蛋白充分溶出，过滤，离心取上清液，稀释至恰当倍数。吸取稀释的酶液lml，加入 CMC溶液4ml，混匀，在40℃保温糖化30min，取出后加入NS试剂5ml，(空白样：5ml蒸馏水十 5mlDNS试剂)蒸煮 5min，取出冷却后进行比色测定，对照标准曲线计算葡萄糖的含量。
1.2.4 酶活计算CMC酶活=(G × N)/( V × t)式中：G――酶分解CMC释放出的葡萄糖量，μg;N――酶粉的稀释倍数;V一-反应用酶量，g;t——反Jdl时间，min。纤维素酶活定义：在pH值为5.0，40℃条件下每分钟水解 CMC释放出1μg葡萄糖所需的酶量为1个酶活单位。
