1.1原理
植酸酶能够分解值酸，释放出无机磷。选用植酸钠为酶的作用底物，通过测定无机磷的释放量可以计算酶活。目前植酸酶酶活的测定方法主要有4种，其中钒钼磷法具有较高的权威性。该方法是Gist-Brocades和BASF公司在1991年提出的，其原理是利用植酸酶水解植酸盐释放无机磷，通过加入酸性钼一钒试剂，使水解反应停止，同时与水解释放出来的无机磷产生颜色反应，形成黄色的钒钼磷络合物，在415nm波长下测定磷的含量。以标准磷溶液(或标准植酸酶)为参照，计算酶活。该方法于1994年列入AOAC，我国已将此法的测定结果作为审批商品植酸酶注册许可证和验收产品的法定商检依据。
1.2 操作方法
1.2.1 试剂
1.2.1.1 稀硝酸溶液量取100ml浓度为65%的浓硝酸，200ml蒸馏水混合。
1.2.1.2 钼酸铵试剂称取100g铂酸铁，溶解在800ml蒸馏水中，再加入10ml 25%的氨水，定容至 1000ml，储介在暗处，保存期8周。
1.2.1.3 钒酸铵试剂称取2.35g钒酸铵NH4VO3。，溶解在 400ml水中，预热至55℃，加人20ml稀硝酸，定容至1000ml储存在暗处，保存期8周。
1.2.1.4 钒钼终止液取钼酸铵溶液和钒酸铵溶液各50ml，混合，在加入100ml稀硝酸，混合，储存在暗处，该溶液需现配现用。
1.2.1.5 醋酸缓冲液(pH值为5.5)称取三水醋酸钠30g和二水氯化钙0.167g，溶解在约500ml蒸馏水中用冰醋酸调解pH值至5.5，定容至1000ml，保存期1周。
1.2.1.6 10%氯化钙溶液称取100gCaCl2。·2H20，加蒸馏水溶解，定容至1000ml，室温储藏。
1.2.l.7 植酸溶液(底物)。称取1.4g植酸钠，溶解在200ml醋酸缓冲液中，在常温下用稀释的冰醋酸溶液调节pH值至5.5，定容至250ml(植酸钠是无水的，Sigma公司生产，分子量为1104，最终植酸钠的摩尔浓度为5.1mM)，该溶液需现配现用。
1.2.1.8 磷酸储备液称取682mgKH2PO4(经105℃烘干至恒重)溶解在100ml醋酸缓冲液中。0℃- 5℃保存。
1.2.1.9 10mM标准磷酸溶液精确吸取10ml磷酸储备液，用醋酸缓冲液稀释至50ml，制成10mM磷酸溶液。该试剂需现配现用。
1.2.2样品酶活的测定称取4g待测样品，用小磨或研钵磨成细粉。加入50ml蒸馏水，再加 1.6ml10%氯化钙溶液，搅拌溶解60min，使酶蛋白充分溶出。吸取10ml，用小型台式离心5min转速为3 000rpm)，做4个平行样。离心结束后各吸取1ml，分别加入到4支试管中(2支做酶活测定，另2支做空白)。同时再准备4支试管，其中2支各加入1ml10mM的标准磷酸溶液，另 2支试管中各加入lml的醋酸缓冲液。酶样液、标准磷酸溶液和缓冲液，均在t=0时加入3ml植酸底物，37℃水溶，在t=60min，各加人2ml反应终止液，混合，测定各自的OD415。空白样在t=0时加入2ml反应终止液，再加入3ml植酸底物，37℃恒温水浴60min以后测定其OD415。
ΔOD415=样品OD415-空白OD415。
1.2.3 酶活计算
设：磷酸标准液ΔOD415为A，酶液ΔOD415为B。A=标准磷酸液的OD415一醋酸缓冲液的OD415。B=酶样品OD415一酶空白液OD415。设：酶粉的重量为W，稀释倍数为K，磷酸标准溶液浓度为P(单位：μmol/l)。酶粉中植酸酶的酶活(FYT/g)=K×B×P/A×W×60植酸酶酶活定义：37℃，pH值为5.5条件下，每分钟水解植酸钠溶液释放1微摩尔无机磷的酶量为l个酶活单位，简称为 1FYT。
1.2.4 注意事项
1.2.4.1 钒酸是有毒的。其小鼠试验的半致死量LD50=18mg/kg.钼钒终止液中钒酸的浓度为0.6mg/ml，最终的比色溶液中约含有钒酸0.24mg/ml。
1.2.4.2 OD415最大不应超过0.8，若超过应作适当稀释。
1.2.4.3上述测定方法适用于样品中酶活>50FYT/kg.
