淀粉酶活性及最适pH之测定
3-1淀粉酶活性
原理:
当还原糖(ex:葡萄糖、果糖)与李氏液(Benedict’s solution)加热时,本氏液所含的Cu2+会被还原糖的官能基还原形成Cu2O之红色沉淀,故可由顏色的改变得知还原糖的多寡。
顏色变化: 蓝 → 蓝绿 → 绿 → 褐 → 橙 → 红(Cu2O)
还原糖之多寡: 少——————————————→寡
步骤:
1. 準备叁支试管标a、b、c,各加入1 ml 3%淀粉液。
2. 试管a:加入1 ml 3% α-amylase
b:加入1 ml新鲜唾液
c:加入1 ml ddH2O
3. 放置加热器反应37℃ 30 min。
4. 之后加a、b、c 3个试管各加入10滴的本氏液。
5. 置於水浴加热并观察各管顏色之变化。
3-1淀粉酶之最适pH
原理:
α-amylase可切断淀粉中α-1,4糖苷键,使淀粉水解变成葡萄糖、麦芽糖、异麦芽糖及6~9个葡萄糖组成的寡糖,藉由在不同的pH值的条件下,利用还原糖的测定(DNS呈色法),在A540nm测吸光值,进而得知酵素最适pH值。
步骤:
1. 1%淀粉:将1 g淀粉溶於100 ml ddH2O,加热100℃至淀粉糊化
2. 取6支试管,先各加入500 μl 1%淀粉液及200 μl 100 mM磷酸缓衝液(pH=5,6,7,8,9)以及ddH2O,在加入100 μl 1% NaCl
3. 将各试管放置37℃下反应30 min
4. 再将各管分别加入100 μl DNS reagent,沸水浴5 min
5. 测OD540下吸光值