纤维素酶在一定的温度和pH条件下，水解羧甲基纤维素钠释放出还原性糖（以葡萄糖计）。在碱性、煮沸条件下，能与3，5二硝基水杨酸起显色反应，其颜色的深浅与还原糖的含量成正比。在550nm下测定其吸光度，可以计算出还原糖的量，从而得出纤维素酶的活力。
2 活性单位
1g固体酶粉（1 ml液体酶）在50℃±0.5℃ PH5.0条件下，每分钟水解底物产生1μg葡萄糖所需酶液的量定义为一个CMC酶活性单位。
3 仪器与设备
3.1 分光光度计（应符合GB9721的有关规定）
3.2 恒温水浴锅
3.3 电热鼓风干燥箱
3.4 分析天平（感量0.1mg）
3.5 电冰箱
3.6 酸度计（精度±0.01pH）
3.7 定时钟或秒表
4 试剂和溶液（若未特别说明均为分析纯：所用水为蒸馏水或去离子水）
4.1 醋酸－醋酸钠缓冲液（PH=5.0）
甲液：量去冰醋酸6ml，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸溶液。
乙液：称去8.2g醋酸钠，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸钠溶液。
应用液：取甲液三份，乙液七份混合，用PH计矫正至PH为5.0±0.05低温冷藏备用。
4.2 3，5二硝基水杨酸试剂（DNS）
甲液：取酒石酸钠182g，溶于500 ml水中，再称取重蒸苯酚5 g、无水亚硫酸钠5 g溶于其中。
乙液：取氢氧化钠20.8 g溶于260 ml水中，再加入3，5二硝基水杨酸6 g。
将甲液和乙液倒入棕色试剂瓶混合，再加入240 ml水暗处放一周后使用。
4.3 1%（W/V）羧甲基纤维素钠溶液
准确称取1.0000g羧甲基纤维素钠溶于100 ml PH=5.0醋酸－醋酸钠缓冲液中配制成1%羧甲基纤维素钠溶液。
4.4 1%（W/V）葡萄糖标准储备液
葡萄糖在80℃±2℃烘箱中烘至恒重，准确称取1.0000g溶解并定溶于100ml容量瓶中，置于4℃冰箱内备用，备用期为三天，必要时加叠氮化钠防腐。
4.4.1 葡萄糖标准应用液
分别吸取葡萄糖标准储备液，0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于50ml容量瓶中，用水定溶于刻度。
5 分析步骤
5.1 标准曲线的制作
按表 1规定的量，分别吸取葡萄糖标准应用液、缓冲液和DNS试剂于各管中摇匀，将各管同时置于沸水浴中反应10分钟，取出后用冷水冷却至室温后，定溶于内直径为15mm的15ml刻度试管中摇匀，再用1cm比色杯，在分光光度计550nm波长处测吸光度，以葡萄糖的量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，三次重复实验的均值获得线性回归方程，线性回归系数（r）应在0.9996以上方可使用（否则重新操作）。每次新配DNS试剂、更换分光光度计或更换分光光度计部件，都应重做标准曲线。
1 葡萄糖标准曲线
|
管号
|
葡萄糖标准应用液
|
醋酸－醋酸钠缓冲液（ml）
|
DNS试剂（ml）
|
|
|
浓度（mg/ml）
|
吸取量（ml）
|
|||
|
0
|
0
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
|
1
|
0.4
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
|
2
|
0.8
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
|
3
|
1.2
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
|
4
|
1.6
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
|
5
|
2.0
|
0.50
|
1.5
|
2.0
|
5.2 样品的测定
5.2.1 待测酶液的置备
称取2g固体酶粉，精确至0.1mg（或用2ml移液管，准确移取2ml液体酶样）用水溶解，准确稀释定溶，（使试样液与空白液的吸光度之差在0.3~0.6范围内）待测。
5.2.2 操作步骤
取4支内直径15mm的15ml的刻度试管，分别加入稀释酶液0.5ml，取其中3支作为测定管，分别加入1.5ml p H 5.0的1%CMC溶液，另一支作为空白管加入2mlDNS溶液，共同在50℃±0.5℃水浴30分钟，三支测定管分别加入2mlDNS溶液，空白管加入1.5ml p H 5.0的1%CMC溶液，在沸水浴中反应10分钟，冷却后定溶至15ml，以空白管调零，在分光光度计550nm处测吸光度。
5.2.3 酶活的计算：
酶活= A×n×1000
0. 5×30
式中：
A— 根据吸光度在标准曲线上，查得的还原糖的量（mg）
n— 酶液的稀释倍数
1000— 由mg换算成ug的换算因子
0.5— 参与反应的酶液的量（ml）
30— 酶反应的时间（min）
