紫外线诱变对平菇菌种纤维素酶活力影响的研究

薛红凡，林琳，王 霞

（吉林农业科技学院，吉林 吉林 132101）

摘要：文章通过研究不同时间的紫外线照射平菇菌种，使得菌种中纤维素酶活力产生变化。试验结果表明：5min紫外线照射时间对平菇菌种中纤维素酶活力的影响最大且均有提高，因此，本试验为紫外线诱变食用菌最佳诱变时间提供了理论依据，利于扩大生产和提高平菇质量。而其它生物活性物质的含量是否也发生变化也还有待于进一步研究。

关键词：平菇菌种；诱变紫外线；纤维素酶活力

中图分类号：S646文献标识码：A文章编号：

1 前言

平菇（学名：Pleurotus ostreatus；又名侧耳）是担子菌门下伞菌目侧耳科一种类，是种相当常见的灰色食用菇，平菇含丰富的营养物质。但是由于平菇自身生长特点，易出现菌丝吃料慢，菌糠利用率低的问题，同时平菇开发种类相对较少，使平菇产业发展受到限制。通过不同时间紫外线诱变，使平菇菌种发生变异，从而为筛选出蛋白质含量高，纤维素酶活力高的菌种提供理论基础。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验菌种 菌种来源由吉林农业科技学院食用菌研究所提供。

2.1.2 药品与试剂 磷酸二氢钾、琼脂、硫酸镁、葡萄糖、3,5-二硝基水杨酸、Tris盐酸、硫酸铵、磷酸二氢钠 以上均为分析纯。

2.1.2 仪器与设备 分光光度计、灭菌锅、水浴锅、培养箱、超净台、冷冻离心机。

2.2 试验方法

预培养(PDA综合培养基)→紫外线诱变(15W紫外线灯，距离30cm，照射1min，3min，5min，7min，9min，第一组空白对照)→扩大培养(摇床25°，180r/min培养4d)。

3 纤维素酶的活力测定

3.1 葡萄糖标准曲线的制作

按照表1操作加DNS溶液各1.5ml，沸水浴5min，最后定容至20ml，绘制图1。

表1 标准葡萄糖溶液的制作

3.2 纤维素酶的提取

发酵液离心→加80%硫酸铵于发酵液中→离心(4°，5000r/min，20min)→取沉淀物透析(20h)→加缓冲液离心→收集上清液，用缓冲液清洗沉淀，离心收集上清液，重复三次合并上清液→浓缩即得粗酶液备用。

3.3滤纸酶活力的测定

取7 支试管编号，各加入0.5mL 酶液和1.5mL 0.05 mol/LpH4.5 的柠檬酸缓冲液。向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性，作为空白对照。将7 支试管同时在50℃水浴中预热5-10min，再各加入滤纸条50mg，保温1h 后，立即向2-7号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应，充分摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL混匀。以1 号试管调零点，在540nm 下测定2-7 号试管测A。在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算出滤纸酶活力（U/g）。在上述条件下，每小时由底物生成1|ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。

滤纸酶活力（U/g）=葡萄糖含量（mg）×酶液定容总体积（ml）×5.56/反应液中酶液加入量（ml）×样品重（g）×时间（h）

4结果与分析

4.1不同时间长度紫外线照射对纤维素酶活力的影响

在OD_540nm下测得酶作用后得纤维素酶活力倍数值如表2。

表2 不同时间紫外线照射菌种后纤维素酶活力倍数比较

由表2可看出经紫外线照射不同时间的平菇菌种中的纤维素酶活力存在差异。其中紫外线照射5 min的菌种纤维素酶活力最高，3min和7 min紫外线照射效果次之。

5 讨论

（1）实验只是在菌种水平上测定了纤维素酶的含量，并得出了相关数据及其趋向性，但是能否表明平菇全株的特点目前尚未明确。

（2）本文通过使用不同时间的紫外线照射平菇菌种，使得菌种中纤维素酶活力产生变化，其中5min紫外线照射时间对平菇菌种中纤维素酶活力的影响最大且均有提高，因此本试验为紫外线诱变食用菌最佳诱变时间提供了理论依据。而其它生物活性物质的含量是否也发生变化也还有待于进一步研究。

参考文献

[1] 李羿,万德光.茯苓紫外线诱变育种[J].药物生物技术,2008,15(1):44-47.

[2] 刘贵巧,米青荣等.平菇长速、长相与酯酶同工酶、可溶性蛋白含量关系的探究[J].北方园艺,2010(8):194-196.

[3]陈香,蒋立建等.紫外线诱变提高细菌产纤维素酶活力的研究[J].化学与生物工程,2008(2):45-47.

作者简介：薛红凡（1986-），女，本科，吉林农业科技学院生物工程学院学生。