温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响

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温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响

   日期:2011-01-27     来源:www.cnenzyme.com    作者:酶网    
核心提示:

温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响

温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响

【目 的】

通过本实验,观察影响酶促作用的一些因素。

【原 理】

唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解,生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色,糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色,睛褐色和红色。最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。根据颜色反应,可以了解淀粉被水解的程度。由于在不同温度、不同酸碱度下,唾液淀粉酶的活性高低不同,所以淀粉被水解的程度也不一样。另外,有些物质可作为激活剂,能提高酶活性,有些物质可作为抑制剂,能降低酶活性,也能影响淀粉被水解的程度。因此、通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度,了解温度、pH,激活剂和抑制 剂对酶促作用的影响。

【试 剂】

1、1%淀粉溶液配制 取可溶性淀粉1克,加5毫升蒸馏水,调成糊状,再加蒸馏水80毫升,加热,使其溶解,最后用蒸馏水稀释至100毫升。

2、稀释唾液制备 将痰咳尽,用水漱口,再含蒸馏水30毫升,作咀嚼运动,2分钟后吐入烧杯中,再用滤纸过滤后待用。

3、不同PH缓冲液

(1)PH6.8缓冲液 用0.2M磷酸二氢钠溶液772毫升,0.1M柠檬酸溶液485亳升,混合即得。

(2)pH5.0缓冲液 取0.2M磷酸氢二钠溶液515毫升,0.1M柠檬酸溶液485毫升,混合即成。

(3)pH8.0缓冲液 取0.2M磷酸氢二钠溶液972毫升,0.1M柠檬酸溶液28毫升,混合即成。

4、0.9%NaCl溶液。

5、0.1%CuSO4溶液。

6、0.1%Na2SO4溶液。

【器 材】

10×100毫米试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、蜡笔。

【操 作】

一、温度对酶促作用的影响

1、取试管三支,用蜡笔编号,每管各加入pH6.8缓冲液20滴,1%淀粉10滴。

2、将第一管放入37℃恒温水浴,将第二管放入沸水浴,将第三管放入冰浴。

3、放置5分钟后,分别向各管加入稀唾液5滴,再放回原处。

4、10分钟后,分别向各管滴加碘液1滴,观察三管中颜色的区别,说明温度对酶促作用的影响。

二、pH对酶促作用的影响

试剂

试管

pH5.0缓冲液

pH6.8缓冲液

pH8.0缓冲液

淀粉溶液1%

稀唾液

1

20滴

10滴

5滴

2

20滴

10滴

5滴

3

20滴

10滴

5滴

2、将上面三管放放37℃恒温水浴中保温。

3、5~10分钟后,取出各管,分别加入1滴碘液,观察三管颜色区别,说明pH对酶促作用的影响。

三、激活剂与抑制剂对酶促用作的影响

1、取试管四支,编号后按下表加入各种试剂。

试剂

试管

缓冲溶液

PH6.8

1%

淀粉溶液

蒸馏水

0.9%

NaCl溶液

0.1%

CuSO4溶液

0.1%

Na2SO4溶液

稀唾液

1

20滴

10滴

10滴

5滴

2

20滴

10滴

10滴

5滴

3

20滴

10滴

10滴

5滴

4

20滴

10滴

10滴

5滴

2、将上列各管放入37℃恒温水浴中保温。

3、5~10分钟后,取出各管,各加入碘液1滴,观察各管颜色的区别,说明激活剂与抑制剂对酶促作用的影响。

 
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